伪狂犬变异株的研究进展及防控经验

【发布时间：2016-04-30 】【点击次数：55 】【所属分类：技术服务建设】

一、PRV变异株的发现
1902年 Aujeszky首次将其与狂犬病相区别作为一种独立疾病，始称Aujeszky’s disease(AD), 后称伪狂犬病。1910年 Schmiedhoffer 发现致病因子是病毒, 称为pseudorabies virus（PrV），有的沿称Aujeszky’s disease virus（ADV）。1933年 Traub用兔脑、睾丸组织体外培养PrV获成功。1934年 Sabin and Wright将PrV划归疱疹病毒群。1995年 ICTV第六次报告列入疱疹病毒科a-疱疹病毒亚科水痘病毒属，分类学名猪疱疹病毒I型。PRV只有一个血清型。
猪伪狂犬病病毒宿主
体内宿主：脑、心、肝、脾、肺、肾、扁桃体，神经节，公猪精囊中
潜伏感染：主要在神经节中
犬、猫、兔、牛、羊、鼠、均是致死性感染。猪最具耐受性，是自然界病毒唯一的贮存宿主。一旦感染终带毒，潜伏感染不表现症状，表现症状到死亡时间极短。
猪伪狂犬病危害
妊娠母猪：流产、死胎、木乃伊为特征的繁殖障碍
哺乳仔猪：高热、呕吐、腹泻、神经症状，死亡高率达100%
成年猪：症状轻微，一过性发热，影响增重
公猪：睾丸鞘膜炎，精子质量下降
母猪：返情率高、屡配不孕
断奶仔猪：神经症状，拉稀，呕吐，偶有死亡
我国1980年前后的伪狂犬的流行情况
在14个省，三个自治区，一个直辖市流行。通过牛羊等间接接触传播。1980年后，随着养殖规模的扩大迅速传播。发病猪场死亡率达到70-100%。
2011年前我国目前伪狂犬病流行特点
由于疫苗普遍接种并配合鉴别诊断技术临床典型病例已较少。很多规模化猪场伪狂犬病基本达到净化。
2012年伪狂犬变异株的发病情况
以母猪流产、死胎、为主；仔猪出生后3-5天神经症状，腹泻、呕吐，死亡率100%；伪狂犬野毒抗体呈阴性猪场，迅速转阳，一个月内gE抗体阳率超过80%。
至2015年伪狂犬变异株的感染情况
初次感染场特别是野毒抗体阴性场，损失惨重;初产母猪以流产，神经症状为主；感染后1年产房逐渐平稳；神经症状比例减少；腹泻比例增高；仔猪野毒抗体阳性率高（大部分为母源抗体）育肥猪发烧、咳喘问题突出，散毒严重，最终影响产房；公猪精液带毒严重。
原因：
1、伪狂犬母源抗体的持续期长
2、现有免疫程序不能保护至育肥期
二、变异株伪狂犬变异在哪里？
基因组多处改变，存在多个氨基酸插入位点，导致抗原性较大改变；欧美国家毒株主要为基因I型，亚洲国家毒株主要为基因II型。我国PRV毒株以基因II型为主，而Bartha疫苗为基因I型，我国早期毒株双城株（S株，伪狂犬疫苗攻毒保护校检毒株）的基因组骨架为基因II型，其UL区的部分片段来自于基因I型。
现有疫苗对变异株的攻毒保护效果

不同伪狂犬疫病苗毒株对变异株株攻毒后的保护结果

2011年以来，出现了一种变异株的伪狂犬病毒，该病毒与经典毒株有显著差异；变异株的毒力更强，更容易致死仔猪。该毒株目前是优势毒株；原有的免疫程序对变异株保护效果一般。
三、伪狂犬变异株的防控经验
阳性母猪可产阴性仔猪
免疫频次
公猪
中和抗体
灭活疫苗
活疫苗
1、伪狂犬的周期性检测
重视公猪的伪狂犬抗原检测
---精液生殖道散毒，疫苗免疫不起作用
步骤及建议程序：
先对公猪采血检测gE抗体；野毒抗体呈阳性的，进行精液病原检测（注：只要伪狂犬野毒未感染精囊，通过加大免疫频次，可压制病原在体内传播）定期采集精液进行抗原检测，建议每季度一次，精液中有伪狂犬野毒病原，公猪必需淘汰；补充野毒抗体为阴性的公猪后备。
母猪按胎次采样检测
抗体检测初次采样比例20%，胎次为配种、配种一次，配种2次，3-4次，5-6次。
抗体检测野毒阳性率判定病原感染的来源；中和抗体检测，特别评价对初产母猪的免疫保护效果（如果群体未感染野毒，针对野毒的中和抗体滴度>1:80；如果感染过野毒中和抗体滴度要高于1:400，注中和抗体针对batha-K61）脐带病原检测---判断野毒垂直传播比例，脐带检出野毒母猪三个月内不适宜配种；口腔分泌液、鼻试子检测，判断群体散毒载量，评价疫苗免疫程序。
仔猪检测---野毒阳性母猪可以产抗原与抗体双阴性的仔猪
注意：90日龄之前仔猪体内的抗体主要为母源抗体，阳性猪场90日龄之前的抗体检测没有意义；抗体采样分布---按日龄采样，主要目的是评价感染发生的时间；采样分布：30日龄，60日龄，90日龄，120日龄和150日龄（注：野毒阳性场，母猪群体的野毒阳性率>50%，仔猪采集90日龄之后的血清）；在野毒抗体阳性比例开始上升前一个月加强免疫；有神经症状死亡的仔猪要立即送检。
2、生物安全措施
原因：感染猪是生物反应器，不断散毒，是猪场野毒重要的传染源
①重视育肥期猪群散毒问题，育肥舍饲养员严进产房
②死淘
有神经症状的仔猪立即死淘
公猪精液排毒，垂直传播影响精液质量，尽量淘汰
③灭鼠工作
鼠患不除，伪狂不止
3、免疫措施
经典株疫苗免疫仔猪基本方案：
1日龄滴鼻，5.0-5.5左右
5-7周首次肌注免疫5.8-6.0（参照母源抗体滴度）
10周左右二次肌注5.8-6.0
120-140日龄日龄时再次加强5.8-6.0
紧急免疫剂量：肌注106.0TCID50
1、伪狂犬细胞免疫发挥更大的作用，频次的作用高于剂量；
2、前期考虑中和抗体的作用，滴鼻免疫不受母源抗体干扰；
3、滴鼻激活的黏膜免疫，占位三叉神经节（主要是TK基因的作用）
4、滴鼻可以切断哺乳期病原的水平传播
首免日龄参考---疫苗母源抗体持续时间

母猪免疫
次数：普免4次/年
免疫剂量：106.0TCID50/次
免疫方式：肌肉注射
注意事项：
配种前一个月加强免疫一次
配种后一个月和产前15天不能用苗
产前一个月可做跟胎免疫一次
后备母猪及后备公猪免疫
免疫次数：普免4次/年
免疫剂量：106.0TCID50 /次
免疫方式：肌肉注射
注意事项：
后备母猪及公猪必需经过检测无野毒感染后才可作为种猪使用
后备母猪配种前2个月免疫一次，配种前1个月加强免疫一次
配种后一个月和产前15天不能用苗
产前一个月可做跟胎免疫一次
灭活苗的作用：
1、gE基因敲除的变异株的灭活苗
目前在申报和临床的
田克恭、童光志、姜平等
2、已有结论
（1）灭活苗可有效阻止发病，但不能有效阻止病原通过呼吸道感染
（2）不能阻止野毒抗体阳转
（3）可显著改善猪群的感染压力
rPRV-gE--EGFP+（HeN1）——佐剂的选择及免疫效果评价
佐剂种类：水佐剂、油佐剂
成品中病毒含量：106.0TCID50/mL
免疫动物：Balb/c小鼠，5周龄，雄性
免疫剂量及方式：皮下注射0.3mL/只，免疫两次，间隔两周
攻毒：HeN1 F5代，50LD50/只，皮下注射

变异株活疫苗的研究
通过敲除TK和gE基因后，伪狂犬毒力显著降低
安全性和有效性
大群试验未发现返祖和基因重组现象
经过大群试验，有效降低伪狂犬的临床发病率
伪狂犬温和净化方案要点
生物安全---灭鼠和消毒，降低水平传播途径
严格的公猪筛选
疫苗免疫频次高-压制野毒散播
免疫程序需要检测数据参考
母猪随产次自然淘汰
补充阴性后备
免疫程序：严重场可考虑变异株的灭活苗和活苗压制
周期：2-3年
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